Wykrywanie DNA Borrelia burgdorferi metodą reakcji łańcuchowej polimerazy w mazi stawowej od pacjentów z boreliozą

Choroba z Lyme jest wywoływana przez krętki porośnięte kleszczem Borrelia burgdorferi1. Od miesięcy do kilku miesięcy po wystąpieniu choroby około 60 procent nieleczonych pacjentów zaczyna mieć krótkie, przerywane napady zapalenia stawów, które mogą powtarzać się przez kilka lat2. Niewielki odsetek tych pacjentów ma ciągłe zapalenie stawów przez rok lub dłużej, stan ten określamy terminem przewlekłe boreliozowe zapalenie stawów 2,3. Ostatecznie zarówno sporadyczne jak i przewlekłe boreliozowe zapalenie stawów ustępują, nawet u nieleczonych pacjentów. Zapalenie stawów z Lyme można zwykle skutecznie leczyć za pomocą jednomiesięcznego cyklu doksycykliny lub amoksycyliny lub dwutygodniowego kursu dożylnego ceftriaksonu lub penicyliny5-7. Jednak niewielki odsetek pacjentów cierpi na uporczywe zapalenie stawów pomimo wielokrotnych kursów doustnej i dożylnej antybiotykoterapii5-7. U tych pacjentów występuje zwiększona częstotliwość HLA-DR4 lub, po drugie, HLA-DR2 w związku z reaktywnością przeciwciała z zewnętrznymi białkami A i B (OspA i OspB) krętka8,9. Nie jest jasne, czy ten przebieg oporny na leczenie wynika z uporczywego zakażenia lub z pozaproduktywnych procesów immunologicznych. Zdolność do wykazania obecności lub nieobecności B. burgdorferi w stawie poprawiłaby naszą wiedzę na temat patogenezy boreliozy.
B. burgdorferi można łatwo wyhodować ze zmian skórnych rumienia wędrownego 10, ale trudno było wykryć krętki w stawach; został odzyskany z płynu stawowego tylko dwóch pacjentów z zapaleniem stawów z Lyme11,12. W przypadku technik immunohistologicznych stwierdzono obecność krętków w tkance maziowej 13, ale ta metoda wykrywania była niejednoznaczna. Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) została ostatnio wykorzystana do amplifikacji i wykrycia DNA B. burgdorferi w hodowlach krętków, 14,15 Ixodes dammini ticks, 16,17 zakażonych zwierząt, 18,19 i pacjentów z boreliozą20-33. W tych badaniach sekwencje DNA zostały pomyślnie wykryte we krwi, 20,21,30,32 płynu mózgowo-rdzeniowego, 22-25,32,33 moczu, 21,25,28,32 skóry, 29-31 i (w ośmiu przypadkach) płyn maziowy21,26,27,32. Tak więc, test PCR jest zdolny do amplifikacji i wykrywania DNA B. burgdorferi, ale jego wartość jako wiarygodnego testu diagnostycznego, szczególnie w płynie maziowym, nie jest jeszcze jasna.
Przedstawiamy tutaj naszą ocenę testów PCR jako testu diagnostycznego na obecność DNA B. burgdorferi w płynie maziowym. Jeśli test może wiarygodnie zidentyfikować obecność krętków, może pomóc ustalić, czy uporczywe zapalenie stawów po leczeniu jest spowodowane aktywnym zakażeniem lub reakcją immunologiczną, która utrzymuje się po eliminacji żywotnych krętków.
Metody
Pacjenci
W ciągu 17 lat pobierano próbki płynu maziowego od 127 pacjentów z boreliozowym zapaleniem stawów, którzy byli obserwowani w klinikach z Lyme w szpitalu Yale-New Haven (1975 do 1987) lub New England Medical Center (1987-1992). Następujące kryteria zostały użyte do zdefiniowania boreliozowego zapalenia stawów: krótkich, przerywanych ataków oligostawowego zapalenia stawów, ekspozycji w obszarze choroby endemicznej, podwyższonej odpowiedzi przeciwciał na B. burgdorferi na enzymatyczny test immunoabsorpcyjny i wykluczenia innych znanych postaci zapalenia stawów
[patrz też: luka anionowa, dna moczanowa objawy zdjecia, nfz przeglądarka skierowań do sanatorium ]