Wykrywanie DNA Borrelia burgdorferi metodą reakcji łańcuchowej polimerazy w mazi stawowej od pacjentów z boreliozą ad 6

W przypadku 29 pacjentów, dla których dostępne były próbki seryjne, wszystkie próbki przed leczeniem były pozytywne. Gdy próbki po traktowaniu stały się ujemne, wszystkie kolejne próbki pozostały ujemne. Dyskusja
Prezentujemy dowody na to, że PCR jest przydatną metodą wykrywania DNA B. burgdorferi w płynie maziowym u pacjentów z boreliozowym zapaleniem stawów. Głównym problemem związanym z tą techniką jest to, że znikome zanieczyszczenie może dawać fałszywie dodatnie wyniki. Aby upewnić się, że zanieczyszczenie nie wpłynęło na nasze wyniki, próbki kontrolne płynu stawowego zostały zebrane i zmagazynowane, jak próbki próbek, ekstrakcję DNA i przygotowanie PCR przeprowadzono w wydzielonym pomieszczeniu, wszystkie produkty PCR były inaktywowane izopsoralenem po amplifikacji, wiele próbek próby ślepej dołączone do każdej grupy badanych próbek, a próbki zostały przetestowane w sposób zaślepiony w dwóch oddzielnych laboratoriach. W obu laboratoriach prawie wszystkie próbki płynu stawów od nieleczonych pacjentów z boreliozowym zapaleniem stawów zawierały wykrywalne DNA B. burgdorferi, większość próbek po leczeniu nie zawierała, a wszystkie próbki kontrolne były ujemne. Ten rozkład byłby bardzo mało prawdopodobny, gdyby próbki zostały zanieczyszczone.
W obu laboratoriach czułość każdego z trzech zestawów primer-sondy OspA była wysoka (75 do 89 procent), a wyniki spośród tych zestawów były umiarkowanie zgodne. Przeciwnie, zestaw starterów-sond, który wykrywał chromosomalny DNA był mniej czuły. Tę rozbieżność obserwowano konsekwentnie we wszystkich naszych badaniach wykrywania B. burgdorferi w płynie maziowym35. Wiele kopii segmentów DNA OspA może znajdować się w krętkach, a zatem cele te mogą być łatwiej wykryte. Alternatywnie, krętki nie zawsze mogą występować w mazi stawowej, ale mogą być zdolne do zrzucania segmentów OspA do płynu z otaczającej maziówki. Pęcherzyki pęcherzykowe zawierające pozachromosomalne DNA są usuwane z powierzchni krętka, 40, 41 i postuluje się, że są mediatorami transferu DNA między organizmami42. Trzecią możliwością jest to, że plazmidowy DNA może utrzymywać się w mazi stawowej po śmierci krętka. W naszym badaniu i innych przypadkach 21,24 wykryto DNA OspA głównie u nieleczonych pacjentów z klinicznie aktywną chorobą. Po leczeniu antybiotykiem wyniki PCR były zwykle negatywne, czego nie można by się spodziewać, gdyby DNA OspA utrzymywało się po zabiciu krętka. Podobnie, w badaniach eksperymentalnych zakażenia B. burgdorferi u myszy, wyniki PCR były prawie zawsze ujemne w ciągu dwóch do czterech tygodni po leczeniu ceftriaksonem (dane niepublikowane). Innym przykładem tego zjawiska jest klirens wirusowego DNA z płynu mózgowo-rdzeniowego w ciągu jednego do czterech tygodni po leczeniu acyklowirem u pacjentów z zapaleniem mózgu wywołanym przez opryszczkę pospolitą43. Wydaje się zatem prawdopodobne, że wykrycie DNA OspA w płynie stawowym wskazuje na obecność żywotnych krętków. Dalsze badania mające na celu wykrycie potencjalnie bardziej labilnych cząsteczek RNA z krętkiem44 mogą pomóc w potwierdzeniu tej hipotezy.
Ponieważ wydzielina stawowa ustąpiła u większości pacjentów w trakcie antybiotykoterapii, zwykle nie było możliwe pobranie próbek płynu maziowego po leczeniu
[podobne: nfz lublin sanatoria lista oczekujących, bean boozled challenge allegro, nfz przeglądarka skierowań do sanatorium ]