Nieprawidłowości transkrypcji PIG-A w granulocytach od pacjentów z napadową nocną hemoglobinurią ad 6

Podczas PCR znakowane radioaktywnie produkty amplifikacji usuwano po każdych trzech cyklach, rozdzielano przez elektroforezę w 2% żelu agarozowym i wizualizowano za pomocą autoradiografii. Pokazano prążki odpowiadające PIG-A i .-aktynie. Ścieżki i 7 uzyskano po 24 cyklach, ścieżki 2 i 8 po 27 cyklach, ścieżki 3 i 9 po 30 cyklach, linie 4 i 10 po 33 cyklach, linie 5 i 11 po 33 cyklach i ścieżki 6 i 12 po 36 cyklach . W Pacjent 15 analiza przez odwrotną transkrypcję i PCR zastosowana u innych pacjentów nie wykazała transkryptu (dane nie przedstawione). Dlatego porównaliśmy poziom ekspresji mRNA PIG-A z mRNA .-aktyny. .-aktynę amplifikowano z podobnymi szybkościami w granulocytach z Pacjenta 15 i u zdrowych osobników, podczas gdy PIG-A amplifikowano z bardzo małą szybkością w granulocytach z Pacjenta 15 (Figura 5). Ponieważ ten pacjent miał kilka normalnych granulocytów, uważano, że pochodzi z nich niewielka ilość amplifikowanego transkryptu PIG-A.
Dyskusja
Wykazaliśmy nieprawidłowości w transkrypcjach genów PIG-A dotkniętych granulocytami od 15 japońskich pacjentów z PNH. U trzech pacjentów nieprawidłowości miały różne wzorce pod względem wielkości, ale wszystkie skutkowały niefunkcjonalnymi białkami PIG-A. U jednego pacjenta poziom transkryptów PIG-A był bardzo niski. U 11 pacjentów wielkość i obfitość transkryptów PIG-A były prawidłowe, ale niektóre transkrypty regionu kodującego o normalnej wielkości zostały wykryte przez transfekcję jako niefunkcjonalne, co sugeruje, że komórki dotknięte chorobą od tych pacjentów również miały mutacje PIG-A. W rzeczywistości, u dwóch pacjentów zidentyfikowaliśmy mutacje punktowe prowadzące do niefunkcjonalnych transkryptów PIG-A.
W naszym poprzednim badaniu z zajętymi liniami komórek B-limfoblastoidalnych ustalonymi od dwóch innych japońskich pacjentów z PNH, poziom transkryptów PIG-A u jednego pacjenta był bardzo niski, a w drugiej delecja jednej zasady w miejscu składania donora powodowała nieprawidłowości. splicing8. W związku z powyższym, wszystkie 17 japońskich pacjentów z badanym PNH ma defekty w genie PIG-A. Ponadto, zaatakowane linie komórkowe ustalone od czterech brytyjskich pacjentów z PNH15 miały niedobory PIG-A (dane niepublikowane), a dotknięte linie komórkowe u czterech pacjentów z Niemiec i jednego pacjenta z PNH z Dominikany podzieliły wadliwy gen z glikozylo-fosfatydyloinozytolem -deficient mutant klasy komplementacji A16. Ponieważ PIG-A jest genem defektywnym w mutacjach klasy A, 7 linii komórkowych musi mieć niedobory PIG-A. U wszystkich 26 pacjentów z PNH, którzy zostali scharakteryzowani do tej pory, PIG-A jest odpowiedzialnym genem. Gdy weźmie się pod uwagę, że 10 lub więcej genów bierze udział w biosyntezie glikozylo-fosfatydyloinozytolu, 17,18, to niezwykła jest jednolitość tych wyników. Zlokalizowaliśmy gen PIG-A na p22.1 chromosomu X, 8 więc gen jest haploidalny w komórkach somatycznych zarówno u samców, jak iu kobiet ze względu na zjawisko inaktywacji X. Ta jednolitość nie jest zaskakująca, jeśli wszystkie geny inne niż PIG-A są autosomalne.
Finansowanie i ujawnianie informacji
Wspierany przez granty Ministerstwa Edukacji, Nauki i Kultury Japonii oraz Fundacji Ono Medical Research Foundation.
Jesteśmy wdzięczni dr T. Kageyama, Y. Kurata, Y. Kanayama, K. Yasunaga, Y. Kishimoto, T. Fujita, T. Masaoka, A. Kanamaru, K. Moriwaki, H. Fujii, N. Takemori i K. Hirai za dostarczenie nas z próbkami krwi od pacjentów, oraz Pani Marii Lourdes Parumog za doskonałą pomoc techniczną.
Author Affiliations
Z Departamentów Immunoregulacji (TM, JT, T. Kinoshita) i Medycyny Wewnętrznej (JN, T. Kitani), Instytutu Badawczego ds. Chorób Mikrobiologicznych, Uniwersytetu Osaka, Osaka; i Departamentem Medycyny Wewnętrznej, szpitalem oddziałowym, Nagoya University School of Medicine, Nagoya (NY, YI) – oba w Japonii.
Prośba o przedruk do Dr. Kinoshita z Departamentu Immunoregulacji, Instytut Badawczy ds. Chorób Mikrobiologicznych, Uniwersytet w Osace, 3-1 Yamada-oka, Suita, Osaka 565, Japonia.
[więcej w: wiedźmin 3 edycja kolekcjonerska allegro, psycholog warszawa centrum, luka anionowa ]